MILE米乐细胞冻存试剂盒使用说明书(BA3309)

一、产品简介

本产品专为各种哺乳动物原代细胞及传代细胞系的冻存保种设计，复苏后能有效保持细胞的存活率，并具有稳定的储存条件，操作也相当简便。产品组分包括：通用细胞冻存液BA3309，容量为100mL。保存条件为-20℃避光存放，有效期为两年。

注意事项

1. 应使用水平离心机，设置合适的离心参数，以避免因操作不当影响实验结果。
2. 此产品为无菌产品，请穿着实验服并佩戴一次性手套，确保无菌操作，避免微生物污染。
3. 使用前需确保试剂完全融化并充分混匀。
4. 在冻存前，确保细胞状态良好。

二、所需材料

细胞冻存材料

1. 仪器：水平离心机、细胞计数仪、-80℃冰箱。
2. 耗材：细胞冻存管、程序性冻存盒、低吸附枪头。

细胞复苏材料

1. 仪器：水平离心机、水浴锅。
2. 试剂：RPMI 1640培养基。
3. 耗材：酒精棉球、低吸附枪头、离心管。

三、使用方法

细胞冻存

1. 使用前，确保MILE米乐细胞冻存液完全融化并混匀。
2. 通过细胞计数仪计算出细胞总数。冻存时细胞的密度一般为1x10⁶/mL。
3. 将细胞进行离心，弃去上清，保留细胞沉淀。不同细胞类型的离心条件有所差异，例如人PBMC细胞的离心条件为300xg，5分钟。
4. 根据细胞数量计算需加入的细胞冻存液体积，用移液枪吸取MILE米乐细胞冻存液并轻轻吹打重悬细胞。
5. 根据计算的体积将细胞分装至冻存管中，并进行标记。请使用专为液氮冻存设计的细胞冻存管，切勿使用普通离心管。
6. 将细胞冻存管置于可逐步降低温度的设备中，如程序性冻存盒，并放入-80℃冰箱，确保温度下降速度约为1℃/min。
7. 24小时后可将细胞转移至液氮中，以延长保存时间。

细胞复苏

1. 打开恒温水浴锅，设置为37℃，取一个离心管，加入5mL细胞培养基，在37℃水浴中加热至培养基达到37℃，约2-5分钟。
2. 取出冻存管，立即放入水浴锅中快速摇动，以迅速融化冻存液。
3. 完全融化后，立即用酒精棉球擦拭冻存管外部，以降低污染风险。
4. 迅速打开冻存管，将冻存液一滴一滴地加入至预热的培养基中，同时轻轻摇晃，结束后移入水平离心机，4℃，300xg离心5分钟。
5. 弃去上清，加入适量的培养基重新悬浮细胞。

MILE米乐致力于生物医疗领域，专注于免疫学、细胞生物学和分子生物学核心试剂的研发、生产与销售。作为一家高新技术企业，MILE米乐以科研技术力量为依托，专注为全球客户提供优质的生物原料和生化试剂。通过高品质的产品和卓越的服务，MILE米乐期待成为行业领先的优质供应商。