### 人前列腺癌细胞VCAP培养说明书

#### 一、细胞培养条件

人前列腺癌细胞VCAP的培养需要特定的环境条件。建议使用37℃、5% CO2的培养箱，以确保细胞的正常生长和繁殖。

#### 二、细胞收到后的处理

在您收到细胞后，首先使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，然后将其置于超净台内进行严格的无菌操作。接着，将细胞瓶放入培养箱中静置3-4小时，使细胞状态稳定，然后进行后续处理。请使用显微镜观察细胞的生长情况并记录不同倍数的拍照（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片将是重要的售后依据，未提供照片的情况下默认您收到的细胞状态良好。

在传代过程中，建议使用瓶内的完全培养基与您自配的完全培养基进行对比培养，换液后记得将瓶盖松开以利于气体交换。

#### 三、细胞培养步骤

a、细胞传代：如果细胞汇合度未超过80%，请将瓶内的培养液收集至离心管，留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2的孵箱内培养；如果细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。

2. 添加约1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞是否大部分变圆并脱落，若是，立即轻敲瓶底并添加5ml完全培养基终止消化。

3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落，取出悬液并转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清液并加入1-2ml完全培养基重悬。

4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶（两个T25瓶），补充新鲜的完全培养基至5-8ml/瓶，然后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存：1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗一次。2. 添加1ml 0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞变圆后，加入5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，并将悬液转移至离心管，1000RPM离心5分钟。3. 弃去上清，加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐，需先在-80℃冰箱内存放24小时以上。

c、细胞复苏：1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至无结晶后，使用75%酒精擦拭外壁；2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的离心管中，1000RPM离心5分钟；3. 弃去上清，重悬细胞于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养；4. 次日更换为新鲜的完全培养基继续培养。

#### 四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能会因附着力弱而脱落，这是正常现象。如果脱落细胞较多，请将所有培养液收集至离心管内，1000RPM离心5分钟，收集上清液以供过渡培养，沉淀后加入1-2ml胰酶，重悬并消化1-2分钟，随后加5ml完全培养基终止反应，再次离心并重悬。最后，按1:2的比例进行分瓶传代，补充新培养基至5-8ml/瓶，并放入培养箱中继续培养。

#### 五、售后条款

1）若细胞出现问题，重发的情况包括：运输中遭遇问题（如细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等）、细胞污染以及细胞活性问题，需在收到后48小时内提供真实实验结果。3天内未告知的，视为产品合格。如有问题，需提供前3天的照片和相关操作步骤。由技术人员判定责任后进行重发。

2）不予重发的情况包括：客户造成的细胞污染、操作不当导致细胞状态不佳、非本库推荐的培养体系等。若细胞收到后2天内未告知问题，则不予重发。

感谢您选择MILE米乐的人前列腺癌细胞VCAP培养方案。我们将竭诚为您提供优质服务与支持。