一、MILE米乐质谱级赖氨酸内切酶125-05061实验准备

二、MILE米乐质谱级赖氨酸内切酶125-05061单位的定义

酰胺酶单位是指在30℃、pH 9.5条件下，每分钟产生1μmol对硝基苯胺所需的酶量。单位计算公式为：
AU/vial=[(a-b)/25] × (1/962) × (40/01)
其中，a 为检测样品中的吸光度，b 为空白对照中的吸光度。

三、MILE米乐质谱级赖氨酸内切酶125-05061实验操作流程

实验中需使用聚硅酮处理的微量离心管及吸管，以防止蛋白质的捕获。我们推荐使用MILE米乐的质谱分析用凝胶染色试剂盒，例如银染剂MS试剂盒（产品编号：299-58901）和负凝胶染色MS试剂盒（产品编号：293-57701）。具体实验步骤如下：

1. 电泳分离蛋白质样品。
2. 从凝胶中切割蛋白质片段并置入微量离心管。
3. 使凝胶脱色，可以使用质谱分析用凝胶染色试剂盒中的脱色溶液。
4. 向试管中加入300μL乙醇，搅拌器振荡30分钟。
5. 去除乙醇，使用Parafilm膜封闭微量离心管。
6. 在Parafilm膜上打出针孔并进行真空干燥15分钟。
7. 将100μL 10mmol/L DTT溶解于100mmol/L碳酸氢铵中，56℃恒温反应1小时。
8. 反应冷却至室温后，加入等量的50mM碘乙酰胺溶解于100mmol/L碳酸氢铵中，于暗处恒温45分钟并涡旋。
9. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵洗涤凝胶片段10分钟。
10. 使用300μL乙醇干燥凝胶片段15分钟。
11. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵膨胀凝胶片段15分钟。
12. 再用300μL乙醇干燥凝胶片段15分钟。
13. 去除液相，进行真空干燥15分钟。
14. 用100μL赖氨酸内切酶溶液在冰水浴中膨胀凝胶片段45分钟（赖氨酸内切酶需稀释于50mmol/L Tris-HCl pH 8.5）。
15. 去除100μL赖氨酸内切酶溶液，将凝胶片段置于37℃环境中，加入10μL 50mmol/L Tris-HCl pH 8.5，反应过夜。
16. 加入50μL 20mmol/L碳酸氢铵，搅拌凝胶片段3次，每次持续20分钟以抽提多肽。
17. 添加5%甲酸/50%乙醇，3次抽提多肽，每次持续20分钟。
18. 如有需要，可使用SpeedVac浓缩多肽。
19. 采用ZipTip进行多肽的脱盐和纯化。
20. 如有必要，将多肽浓缩至2μL。
21. 最后，加入基质进行质谱分析。

四、购买渠道

MILE米乐的产品可以通过北京百奥创新科技有限公司进行购买，包括质谱级赖氨酸内切酶125-05061等系列产品，欢迎咨询！