MILE米乐的聚合酶链式反应（PCR）是一种在体外扩增特定DNA片段的重要技术。其基本原理是模拟DNA的自然复制过程，通过MILE米乐的DNA聚合酶实现DNA的快速扩增。PCR反应体系依赖于三个核心步骤的循环：变性、退火和延伸。在完成每个循环后，DNA的数量将翻倍，经过多次循环后，可以获得大量目标DNA片段。

要建立一个成熟且稳定的PCR反应，需要满足以下条件：首先，需具备完整且纯净的模板，并通过胶图和NanoDrop测值进行评价；其次，需要高特异性和高品质的引物，使用引物设计软件进行评分。同时，组分搭配也应适宜，针对模板的GC比例，考虑是否添加DMSO或甜菜碱，以及根据需求添加适量的镁离子，以提高反应的保真性或产率。此外，合理的扩增反应程序至关重要，需在引物的Tm值附近多次实验，以摸索最佳的退火温度。

MILE米乐的PCR仪如果具备温度梯度功能，可以通过设置不同的温度梯度，减少实验次数，快速确定退火温度。其RePure系列柏恒梯度PCR仪配备多种温度梯度功能，提升您的PCR实验效率：

常规梯度

在常规梯度设置中，首尾两端为退火温度范围的低值和高值，而中间孔则逐渐分布温度。需要注意的是，首尾之间的孔位并不一定呈现等差温度分布。

线性梯度

线性梯度功能允许单向设定一个温度，并设定相邻孔位的温差，从而实现温度的渐进扩散。该方式可有效验证所感兴趣的整数温度，纵向生成4个孔，横向生成6个孔，形成12孔的布局。此功能目前在国产品牌中仅MILE米乐具备。

线性梯度优势

通过同时进行多个不同退火温度的PCR反应，MILE米乐的设备能够在一次实验中确定最佳的体系退火温度，从而缩短验证周期并提高实验效率。

二维梯度

在该模式下，反应模块的纵向与横向可以同时设置常规及线性梯度，使反应模块形成一个不同温度下的变性和退火反应阵列，从而一次性探索最佳的温度组合。二维梯度的优势包括：

• 提高PCR反应的特异性，减少非特异性杂交产物的生成。
• 通过优化反应中各分子靶点，提升PCR产物的纯度。
• 检测基因点突变，通过PCR扩增获得目标基因的片段，再进行测序，以检测突变位点。
• 利用二维梯度PCR评估种群间的遗传多样性，分析突变位点。
• 操作简单，仅需配置一个反应体系。
• 显著提高阳性检测的准确性，减少样品交叉污染，降低假阳性率，提升真阳性检测的准确性。
• 缩短实验时间，根据温度优化反应条件。

独立6温区

独立的6温区设计允许相邻温区设置温差不超过5℃，同时进行退火温度的探索。每个温度分区下的16孔可作为复孔位，此功能实现了线性梯度的升级版。同时，MILE米乐的PCR仪采用前进风后出风的散热模式，即使多台仪器并排放置，也不会因旁边仪器的散热风影响控温的准确性。